摘要
采用改良的 Franz擴散池法進行體外釋放與透皮試驗，分別以半透膜和離體小鼠皮膚作為透過屏障，采用高效液相色譜儀（HPLC）測定指標性成分羥基-α-山椒素、6-姜辣素及人參皂苷Rb1的含量，6-姜辣素以及羥基-α-山椒素，評價凝膠貼膏的釋放與經皮滲透效果。椒姜凝膠貼膏具有體外釋放和透皮性能，體外釋放符合Higuchi方程，經皮滲透行為符合零級動力學方程。
引言
中藥穴位貼敷給藥是一種在中醫藥理論指導下充分體現中醫藥特色的給藥方式，具有給藥劑量小、定點給藥、用藥次數少，作用時間長、臨床療效好等優點。中藥凝膠貼膏是指中藥或中藥提取物與水溶性高分子化合物或親水性物質混勻后，涂布于裱背材料上制得的外用貼劑。凝膠貼膏具有載藥量大、給藥劑量準確、藥物釋放平穩、血藥濃度穩定、透氣性好、皮膚刺激小、使用方便并可以重復使用等特點，克服了傳統穴位貼敷療法的藥膏所存在的易粘染衣物、皮膚刺激性和致敏性等缺點，是實現中藥穴位貼敷給藥的理想劑型。神闕穴，位于臍正中，為任脈要穴，與人體諸經百脈相連通。中藥穴位貼敷給藥，可用于治療多種疾病。神闕穴貼敷給藥在健脾合胃、理腸止瀉的治療領域效果顯著，適用于消化不良、腹痛、腹瀉、脫肛等病證的治療。
本研究采用穴位貼敷與凝膠貼膏相結合的方式給藥，既發揮了凝膠貼膏的劑型特點，又能使藥物與經絡穴位在協同作用下調節臟腑功能和治療疾病。椒姜凝膠貼膏是以經典名方為基礎的加減化裁方研制的用于神闕穴貼敷給藥的中藥外用制劑，處方由花椒、干姜、人參、枳實、白芍 5 味藥組成，用于治療脾胃虛寒證，現代研究證明其具有促進胃腸動力的作用。椒姜凝膠貼膏的臨床定位是術后胃腸功能障礙的治療。本文以處方藥花椒、干姜、人參 3 味藥中的主要有效成分羥基-α-山椒素、6-姜辣素和人參皂苷 Rb1為評價指標，考察椒姜凝膠貼膏的體外釋藥動力學特性。
材料
DHC-6TD 型透皮儀
透析袋（截留相對分子質量 3000Da）
雄性 SPF 級昆明種小鼠， 透皮實驗小鼠體質量 16~18 g
貼膏制備
5 味藥（1 個處方量=27 g）采用水蒸氣蒸餾法提取揮發油，藥渣加適量乙醇回流提取 ，過篩后合并濾液，回收乙醇后與水煎液一并濃縮成適宜稠度的稠膏。取各種輔料，按一定的比例制成基質。精密稱取處方量椒姜浸膏、揮發油、基質，稠膏與基質比為 1:3，攪拌混勻，涂布于襯布上，加蓋聚乙烯膜， 即得椒姜凝膠貼膏。
體外釋放試驗
釋放試驗采用 Franz 擴散池，擴散池體積12 mL，擴散面積1.767 cm2，接收液 PEG400-95%乙醇-生理鹽水（ 1:3:6），超聲30 min 排除氣泡，磁力攪拌轉速 600 r?min-1，控制溫度（ 32±0.2）℃，接收池內加入攪拌子，將預處理的透析膜固定在擴散池與接收池之間，取制備的椒姜凝膠貼膏，將其緊密貼敷于擴散池內的透析膜上（ n=6）。計時，分別在 0.5，1，2，4，8，12，24 h 的時間點將接收液全部取出，同時補加同體積的新鮮接收液。將取出的接收液過 0.22 μm微孔濾膜，取續濾液作為供試品溶液，測定供試品中 3 種待測成分的含量，繪制釋放曲線，見圖 1。
圖1. 椒姜凝膠貼膏中指標成分的累積釋放曲線（xˉ± s，n=6）
結果椒姜凝膠貼膏中羥基-α-山椒素，6-姜辣素與人參皂苷 Rb1 在 24 h 的累積釋放量分別為695.78，179.48，175.85 μg，平均釋放速率分別為16.41，4.23，4.15 μg?cm-2?h-1。椒姜凝膠貼膏中羥基-α-山椒素，6-姜辣素與人參皂苷 Rb1 釋放率規律均符合 Higuchi 方程，見表1。
表1. 椒姜凝膠貼膏中指標成分的體外釋放動力學方程
體外透皮試驗
將小鼠斷頸處死，用脫毛劑脫去鼠毛，在生理鹽水中清洗后小心剪下鼠皮，剝離脂肪組織，注意保留腹部皮膚的完整性，清洗干凈后，置于生理鹽水中，存放在4 ℃冰箱中備用，得到制備完成的離體鼠皮。將透析膜換成小鼠皮，取制備的椒姜凝膠貼膏，將其緊密貼敷于擴散池內的小鼠皮膚角質層上（n=7）。其他條件與操作同 體外釋放試驗。測定供試品中 3 種待測成分的含量，繪制透過曲線，見圖2。
圖2. 椒姜凝膠貼膏中指標成分的累積透過曲線（xˉ± s，n=7）
結果椒姜凝膠貼膏中羥基-α-山椒素，6-姜辣素與人參皂苷 Rb1在24 h 的累積透過量分別為97.91，27.11，12.43 μg，累積透過率分別為9.40%，9.70%，3.01%，平均透過速率分別為 2.31，0.64，0.29 μg?cm-2?h-1。椒姜凝膠貼膏中羥基-α-山椒素，6-姜辣素與人參皂苷 Rb1透過率規律均符合零級方程。
待24 h體外透皮試驗結束后，去除皮膚角質層上的凝膠貼膏并將皮膚表面清洗干凈，剪碎有效滲透面積的皮膚，超聲提取，測定藥物含量，羥基-α-山椒素，6-姜辣素與人參皂苷 Rb1 皮膚滯留量分別為19.56，3.59，1.61 μg。根據上述得到的透皮速率可知，滯留在皮膚中的羥基-α-山椒素、6-姜辣素與人參皂苷 Rb1仍能繼續釋藥。
討論
椒姜凝膠貼膏3個指標性成分的釋放行為符合 Higuchi 方程，說明椒姜凝膠貼膏屬于藥物可均勻地分散于骨架材料中的骨架型緩釋制劑。根據表1中Ritger-Peppas 方程對釋放行為做進一步分析，發現3種成分的釋放為非 Fick 擴散，即藥物的擴散和骨架溶蝕協同作用。椒姜凝膠貼膏中三種成分的透過規律符合零級方程，說明該制劑在用藥后能在機體內以恒定速率釋放藥物；椒姜凝膠貼膏中3種指標性成分的皮膚滯留量測定結果顯示，凝膠貼膏中的成分在經皮吸收過程中會在皮膚內產生滯留，形成貯庫。
藥物的物理化學性質決定了它在皮膚內的轉運速度，對其經皮吸收的影響復雜。處方中人參皂苷 Rb1相對分子質量大，較難透過角質層。本實驗中，測得人參皂苷 Rb1 在未加促滲劑的情況下可以穿透小鼠皮膚，可能一是選擇了通透性較好的小鼠皮膚作為透過屏障，二是本處方中的揮發油對人參的經皮滲透起了一定的促進作用，三是有部分人參皂苷通過毛囊等附屬器途徑經皮滲透。
文獻來源：王明碩，杜茂波，沈碩，黨瑞華，王嵐，易紅，姚瑤，王春民，劉淑芝．椒姜凝膠貼膏的體外釋藥動力學與藥效學評價[J/OL]．中國實驗方劑學雜志. https://doi.org/10.13422/j.cnki.syfjx.20220155
* 本文轉載自LOGAN官方網站
