諾坦普 (NanoTemper)
新一代 Monolith 系列分子互作分析儀
MO 系列分子互作儀,采用創(chuàng)新性的光譜位移技術(shù) (Spectral Shift) 和 經(jīng)典的微量熱泳動(dòng)技術(shù) (MicroScale Thermophoresis, MST),輕松檢測(cè)具有挑戰(zhàn)性的分子互作。僅需極微量的樣品 , 即可在液體環(huán)境中快速、精確地定量檢測(cè)各種類型的分子間相互作用力,且檢測(cè)濃度范圍廣、操作簡(jiǎn)單。
1. 技術(shù)優(yōu)勢(shì)
功能全面,靈活應(yīng)對(duì)不同類型的親和力檢測(cè)項(xiàng)目
(1)實(shí)現(xiàn)幾乎所有類型分子間的親和力檢測(cè):從IDPs、膜蛋白、大型蛋白復(fù)合體到PROTACs、小分子甚至離子,檢測(cè)各種類型的分子間結(jié)合。
(2)不依賴于分子量和粒徑變化檢測(cè):結(jié)合檢測(cè)不受由配體結(jié)合引起的粒徑和分子量變化限制。
(3)樣品消耗量極低:為 ITC 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備大量的、高濃度的互作樣品是非常困難的。Monolith 系列僅需幾微升的樣品濃度即可,為您節(jié)約寶貴的樣品。
(4)液體環(huán)境檢測(cè),更接近天然條件:在液體環(huán)境中直接檢測(cè),且適用于幾乎所有的緩沖液,保證樣品在天然條件下自由發(fā)生相互作用,獲得更可靠的結(jié)果。
(5)不僅限于取得Kd值數(shù)據(jù):研究人員還可計(jì)算結(jié)合的化學(xué)計(jì)量比*和熱力學(xué)參數(shù)*,并通過競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合實(shí)驗(yàn)進(jìn)行相對(duì)親和力
和協(xié)同性評(píng)估*。
* 需進(jìn)行線下數(shù)據(jù)處理及分析,無法在MO系列儀器配套軟件中完成。
(6)不局限于兩種分子間的互作分析:競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合實(shí)驗(yàn)、多種分子結(jié)合檢測(cè)都可以輕松搞定。
高品質(zhì)的毛細(xì)管則保證了高品質(zhì)的數(shù)據(jù),使用毛細(xì)管的優(yōu)勢(shì)眾多:僅需微量樣品,在溶液中檢測(cè),
接近天然環(huán)境,無需固定樣品,甚至無需進(jìn)行蛋白純化。
2. 技術(shù)原理
Monolith 可搭載光譜位移和 MST 兩種生物物理檢測(cè)方法,用于結(jié)合親和力的檢測(cè)。
在實(shí)驗(yàn)中,我們對(duì)其中一個(gè)分子進(jìn)行熒光標(biāo)記*,然后將其與一系列梯度稀釋的結(jié)合分子等量混勻,接下來使用毛細(xì)管吸取樣品并放入儀器開始檢測(cè)。
*此外,色氨酸內(nèi)源熒光也可用于免標(biāo)記 MST 檢測(cè)。
(1)光譜位移技術(shù)(Spectral Shift )
光譜位移技術(shù)通過熒光發(fā)射光譜的藍(lán)移或紅移來檢測(cè)分子間的結(jié)合。Monolith X 在等溫條件下精確檢測(cè)
650nm 和 670nm 雙波長(zhǎng)的發(fā)射光,因而能夠精確檢測(cè)到極細(xì)微的光譜位移。接下來,以配體濃度為橫坐標(biāo),雙波長(zhǎng)熒光強(qiáng)度的比值為縱坐標(biāo)作圖,擬合得到平衡解離常數(shù) Kd。

(2)微量熱泳動(dòng)技術(shù)(MicroScale Thermophoresis)
微量熱泳動(dòng)(MicroScale Thermophoresis,MST) 是一種定量分析生物分子間相互作用的前沿技術(shù)。通過精確檢測(cè)熒光變化,結(jié)合靈敏的熱泳動(dòng)現(xiàn)象,MST 提供了一種靈活、強(qiáng)大和快速測(cè)量分子間相互作用的
方法。MST 技術(shù)是通過激光在溶液中產(chǎn)生精確而短暫的溫度變化從而檢測(cè)配體結(jié)合引起的熒光強(qiáng)度變化。以配體濃度為橫坐標(biāo),熒光值為縱坐標(biāo)作圖,從而獲得平衡解離常數(shù) Kd。

MO 系列儀器測(cè)量一個(gè) Kd 值僅需 10 分鐘,專家模式下最快僅需 90 秒,而無需額外冗長(zhǎng)的數(shù)據(jù)分析。通過檢測(cè)與配體結(jié)合后,熒光標(biāo)記的蛋白或者具有自發(fā)熒光的樣品的熒光強(qiáng)度在溫度梯度中隨時(shí)間而變化 (上左圖中灰色部分),然后將選定時(shí)間段內(nèi)的熒光強(qiáng)度對(duì)應(yīng)配體濃度進(jìn)行擬合作圖,軟件自動(dòng)計(jì)算得到該結(jié)合的親和常數(shù) Kd 值 (上右圖)。
3. 儀器軟件
智能軟件自動(dòng)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,使您對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加自信。
對(duì)于大多數(shù)的軟件,當(dāng)您加載樣品之后才會(huì)啟動(dòng)。但是 MO 軟件別具一格——它不但可以在實(shí)驗(yàn)啟動(dòng)之前
為您提供每一步驟的詳細(xì)指導(dǎo),助您快速設(shè)置實(shí)驗(yàn);而且實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),會(huì)立即根據(jù)所得數(shù)據(jù)提供實(shí)驗(yàn)優(yōu)化
建議,全程為您提供可靠信息。MO. Control 2 軟件增加而了緩沖液條件優(yōu)化功能,提高效率,幫助您快速獲得結(jié)果。
4. 應(yīng)用范圍
Monolith 系列分子互作儀可以檢測(cè)幾乎所有類型的分子互作,包括蛋白,小分子,多肽,核酸,
脂類等,應(yīng)用范圍非常廣泛。
(1)蛋白——小分子
? 自噬—溶酶體靶向降解
? 基于結(jié)構(gòu)的藥物設(shè)計(jì)
? “靶向降解組學(xué)”鑒定中藥成分靶點(diǎn)
? 中藥小分子抑制劑作用機(jī)制
? 靶向雄激素受體液 - 液相分離的藥物開發(fā)
? 新型泛素化反應(yīng)的分子機(jī)制
(2)蛋白——離子
? 植物硝態(tài)氮新受體
? 植物免疫抑制與廣譜抗病機(jī)理
? 銅元素調(diào)節(jié)水稻廣譜抗病毒的機(jī)制
? 低溫特異鈣信號(hào)的感知和應(yīng)答機(jī)制
(3)蛋白——多肽
? 植物防止多精受精的分子機(jī)制
? 小肽—受體激酶調(diào)控花粉與柱頭識(shí)別的分子機(jī)理
? 植物重要肽激素作用機(jī)理
? 多肽 PROTAC 降解致癌蛋白
(4)蛋白——蛋白
? 淬滅抑制蛋白 SOQ1 調(diào)節(jié) qH 的作用機(jī)制
? 胃癌基因治療新靶點(diǎn) CPEB3 作用機(jī)制研究
? 精子與卵子受精識(shí)別的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)
? 抗原表位研究
(5)蛋白——核酸
? CRISPR-Cpf1 識(shí)別剪切 RNA 的分子機(jī)制
? 核酸適配體檢測(cè)霉菌毒素
(6)蛋白——脂類
? 新冠病毒 S 蛋白結(jié)合膽固醇
? 調(diào)控蛋白與磷脂酰肌醇二磷酸識(shí)別機(jī)制
(7)蛋白——復(fù)合物
? 蛋白酶體與去泛素化酶動(dòng)態(tài)調(diào)控機(jī)制
(8)蛋白——納米顆粒
? 靶向乳酸代謝的工程仿生納米顆粒治療膠質(zhì)瘤
? 多肽修飾的納米顆粒抑制病毒侵染
? 核酸適配體修飾的納米顆粒探針
(9)蛋白——糖類
? 流感病毒結(jié)構(gòu)改變介導(dǎo)病毒在人類傳播的機(jī)制
(10)免純化 / 無標(biāo)記檢測(cè)
? 老藥新用,Wnt/β-catenin 信號(hào)通路活性抑制
? 血清中多克隆抗體 - 海洛因結(jié)合檢測(cè)
? 葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抑制劑